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PCR專題
聚合酶鏈式反應（Polymerase?chain?reaction，PCR）是一種分子生物學技術，用于體外擴增特定的DNA片段。PCR技術主要過程是，通過人工合成的一小段單鏈DNA片段（引物）與模板DNA特定的區域特異性結合，以四種dNTP為底物，通過DNA聚合酶沿著引物和模板形成的雙鏈部分的3’端聚合形成DNA片段，實現DNA體外擴增。
PCR技術的發明使微量的核酸操作變得簡單易行，同時使核酸研究脫離于活體生物，極大地推動了分子生物學以及生物技術產業的發展。隨著對PCR研究的不斷深入，人們對常規PCR進行技術改進而衍生出了多種PCR技術，如熒光定量PCR、逆轉錄PCR、RACE-PCR、巢式PCR、反向PCR、降落PCR等。
常見的PCR技術
熒光定量PCR是在反應體系中加熒光基團，利用熒光信號實時檢測PCR進程并通過標準曲線對初始模板進行定量分析。
逆轉錄PCR是以RNA為模板，首先利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA，再以cDNA為模板進行PCR擴增。
RACE即cDNA末端快速擴增技術，利用RACE可以通過已知的部分cDNA序列來得到完整的cDNA的5′和3’端。
巢式PCR是利用兩套引物進行兩輪PCR擴增。使用巢式PCR進行連續兩輪擴增可以提高擴增的特異性和靈敏度。
反向PCR是用反向的互補引物來擴增兩引物以外的未知序列的片段（常規PCR是對兩引物之間的片段進行擴增）。
降落PCR是對PCR反應體系中退火溫度進行優化，通過設置一系列不斷降低的退火溫度以提高PCR反應的特異性。
PCR實驗
PCR技術應用
PCR技術在基因組學、分子生物學、臨床醫療診斷及法醫學等領域有著廣泛的應用。下面為您介紹部分PCR應用領域：
- 克?。豪肞CR克隆方法可將經過PCR擴增的雙鏈DNA直接連接到載體上，與傳統方法方法相比，不需要限制性內切酶的參與，操作更簡便；
- 測序：PCR可使微量的核酸得到富集，隨后將核酸克隆至載體中進行測序；
- 基因突變與檢測：PCR技術能夠通過克隆將所需突變引入目的基因中，繼而進行突變研究；
- 臨床醫療診斷：PCR現已應用于細菌/病毒類疾病、遺傳疾病及腫瘤等疾病的診斷；
- 法醫物證學：從案發現場的一根毛發、一滴血或者一個細胞中擴增出足量的DNA供分析研究和檢測鑒定；
僅供科研
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